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本发明公开了一种联合检测肿瘤标志物的酶联免疫检测试剂盒。本发明所述检测试剂盒由包被有NSE、CYFRA21-1和DKK1单克隆抗体的多孔板,辣根过氧化物酶标的NSE、CYFRA21-1和DKK1,显色底物TMB和底物终止液组成。本发明所述检测试剂盒具有简便、灵敏、稳定、重复性好等优点,具有实用价值。