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本发明公开了一种双抗夹心酶联免疫检测试剂盒及其制备方法。本发明所述检测试剂盒由包被有NSE和CK19单克隆抗体的多孔板,辣根过氧化物酶标的NSE和碱性磷酸酶标记的CK19,显色底物TMB、PNPP、磷酸氢二钠和底物终止液组成。本发明所述检测试剂盒具有简便、灵敏、稳定、重复性好等优点,具有实用价值。