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本发明公开了一种耐高温碱性木聚糖酶的制备方法,属于酶制剂制备技术领域。以产耐高温碱性木聚糖酶的嗜热芽孢杆菌(Bacillus thermophilus)701为出发菌株,并通过优化培养基组成和发酵工艺经液体深层发酵制备出一种耐高温、耐碱性强、作用条件宽泛、不具有纤维素酶活性的适合造纸、食品和饲料等领域的耐高温碱性木聚糖酶。酶比活力为350-420IU/ml;最适反应温度为65℃,适用温度范围为40-75℃;最适反应pH值为10.0,适用反应pH值范围为5.0-11.0。