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本发明涉及一种细菌纤维素生产菌株的活菌计数方法,⑴制备菌体粗悬液;⑵方法三中所得粗悬液经离心后,获取菌体,以含一定量纤维素酶的生理盐水或磷酸盐缓冲液将菌体重悬,至初始体积;⑶梯度稀释:先向梯度稀释液中添加一定量的纤维素酶,再进行梯度稀释实验;⑷充分混匀后,涂布计数或倾注计数。本方法以纤维素酶将菌体从细菌纤维素中释放,制得均匀的菌悬液。并通过向梯度稀释液中添加纤维素酶,达到充分降解菌体间连接的纤维素丝的目的,避免在计数过程中,由于纤维素的存在使菌体无法完全区分,造成菌落聚集或无法计数,该方法应用于涂布计数和倾注计数法时,菌体分离效果极好。