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本发明公开了一种能同时识别庆大霉素和西索霉素的特异性单克隆抗体,本发明的单克隆抗体是由杂交瘤细胞EDC/2D5所分泌的,该杂交瘤细胞保藏在中国典型培养物保藏中心,其保藏号为CCTCC NO:C201145。本发明还公开了特异性单克隆抗体、包被原、免疫原的制备方法和酶联免疫检测方法及酶联免疫分析检测试剂盒。与现有技术相比,本发明制备的单抗可以同时识别庆大霉素和西索霉素,提高了现有技术的检测效率,本发明的试剂盒和方法具有操作简便、灵敏、准确等优点。