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本发明公开了一种能识别头孢氨苄、头孢羟氨苄和头孢拉定的特异性单克隆抗体和一种用于检测头孢氨苄、头孢羟氨苄和头孢拉定的酶联免疫方法及试剂盒,本发明的单克隆抗体是由保藏号为CCTCC NO:C201340的杂交瘤细胞株3A6所分泌的。与现有技术相比,本发明制备的单克隆抗体可以同时识别头孢氨苄、头孢羟氨苄和头孢拉定,本发明的酶联免疫方法及试剂盒具有检测效率和灵敏度高,精密度和准确度好等优点。